藍(lán)耳病病毒（PRRSV）自1996年傳入中國，10年后曾變異產(chǎn)生高致病性毒株(HP-PRRSV)造成過重大危害，HP-PRRSV的遺傳學(xué)特點(diǎn)、病毒的致病力、疫苗研制以及病原檢測方法等多個(gè)方面取得了較大成果，2012年后NADC30-LikePRRSV毒株分別在河南、福建、山東、廣西、東北地區(qū)陸續(xù)被發(fā)現(xiàn)，說明NADC30-LikePRRSV株是由NADC30傳播演化而來，多個(gè)地區(qū)都有分離結(jié)果的報(bào)導(dǎo)，也預(yù)示著該毒株有成為國內(nèi)新的優(yōu)勢毒株的潛力。本文根據(jù)山西地區(qū)某規(guī)?；i場對NADC30-LikePRRSV的診斷方法、防控過程，總結(jié)了對該毒株防控工作的一些經(jīng)驗(yàn)和教訓(xùn)，供大家參考。

1病例概述

該場存欄二元基礎(chǔ)母豬1800頭，主要對外提供體重15kg左右的商品苗豬。 2016年12月22號開始使用HuN4-F112株疫苗，由“每年2/6/10月的種豬普免”更改為“母豬產(chǎn)后14天1頭份/頭跟胎免疫”，此前半年內(nèi)使用過AtccVR2332、CH-R1、R98株多種疫苗。

1.1 臨床表現(xiàn)

2017年1月4號左右，發(fā)現(xiàn)妊娠母豬體表寄生蟲較多，耳朵內(nèi)側(cè)有黑色污垢，仔細(xì)觀察才確定母豬普遍背腹部、耳尖有針尖狀出血點(diǎn)，皮毛雜亂、無光澤，部分母豬眼角分泌物增多，便秘母豬比例上升，體溫測量39.0-39.7 ℃。

2017年1月11、12號妊娠舍2、3、4、5棟按照技術(shù)部制定的免疫程序，普免了豬瘟、圓環(huán)疫苗各2頭份。隨后病情加重，2017年1月13號4、5棟妊娠母豬開始發(fā)生流產(chǎn)，母豬的流產(chǎn)主要集中在妊娠80日齡中后期階段（圖1）。另外，2017年1月23號分娩舍出現(xiàn)零星妊娠105-107d早產(chǎn)，排出不足月的活胎兒或死胎，活胎生命力較弱，基本上兩天內(nèi)就會(huì)死亡。正常產(chǎn)的死胎較多。母豬普遍體溫升高，可達(dá)到41℃，臥地不食（表1）。保育豬未表現(xiàn)出PRRS嚴(yán)重癥狀。臨床初步判定為PRRSV感染癥狀。

圖1.流產(chǎn)及早產(chǎn)胎兒

表1，1月下半旬妊娠母豬發(fā)病情況統(tǒng)計(jì)，S為妊娠舍，F(xiàn)為分娩舍

1.2 處理措施

1.2.1

緊急采集4份胎兒、10份血樣，第一時(shí)間送至華南一動(dòng)物疫病診斷中心去化驗(yàn)、確診。

1.2.2 綜合防控：

1）加強(qiáng)和完善豬場內(nèi)部生物安全措施，人員進(jìn)出豬舍進(jìn)一步加強(qiáng)消毒和隔離，禁止生產(chǎn)區(qū)人員串舍。

2）封群管理，做好已引進(jìn)后備母豬的隔離和馴化，近期內(nèi)不再從外部引種。產(chǎn)房和保育做到全進(jìn)全出，杜絕外來人員進(jìn)入?yún)⒂^。

3）健全消毒措施，每天勤換消毒盆，加大每周豬舍消毒力度；病死豬焚燒或者深埋處理。

1.2.3

加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和豬舍環(huán)境控制，減少應(yīng)激，注意平時(shí)的室溫、濕度和通風(fēng)，漏縫地板下的水泡糞及時(shí)排除，減少室內(nèi)有害氣體的含量，包括氨氣、硫化氫、碳氧氣體等。

1.2.4

豬群藥物預(yù)防與保健。提高豬群抵抗力，防止繼發(fā)感染。

1）藥物保?。夯A(chǔ)母豬飼料中添微生態(tài)制劑2 Kg、愛樂新800g、艾農(nóng)1 Kg/T，連續(xù)一個(gè)月。

2）藥物治療：針對發(fā)熱超過40℃妊娠母豬及時(shí)注射抗生素、解熱鎮(zhèn)痛藥和黃體酮，爭取先把母豬體溫降下來；針對有分娩預(yù)兆的母豬，肌注黃體酮，目的讓其保胎，增加妊娠天數(shù)，盡量減少早產(chǎn)比例；針對妊娠母豬體表寄生蟲問題，噴灑有效濃度的特?cái)晨巳芤骸?

1.2.5 免疫調(diào)整防控

發(fā)病種豬群暫時(shí)停止普免工作，等檢測出病原序列后再制定后期免疫程序，生長豬按原先免疫方案進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1采樣化驗(yàn)報(bào)告

送檢的2份胎兒呈弱陽性，4份血清呈弱陽性，1份血清呈強(qiáng)陽性。因?yàn)椴≡礄z測到豬瘟、圓環(huán)、偽狂犬（表2，3），所以僅圍繞藍(lán)耳病毒的結(jié)果進(jìn)行報(bào)告。

表2 病原檢測方法及標(biāo)準(zhǔn)

表3 病原學(xué)檢測報(bào)告單 說明：“+”表示病原感染陽性；“-”表示病原感染陰性。

2.2 病原檢測電泳實(shí)驗(yàn)

PRRSV檢測方法及判斷標(biāo)準(zhǔn)：通過擴(kuò)增 Nsp2基因上覆蓋片段缺失的區(qū)域來區(qū)別經(jīng)典型PRRSV和變異型PRRSV。如果樣品中有變異型PRRSV存在，將能夠擴(kuò)增出 418bp 的片段。如果樣品中有經(jīng)典型PRRSV存在，則能夠擴(kuò)增出 508bp的片段。如果樣品中兩種亞型的PRRSV均存在則可以同時(shí)擴(kuò)增出大小分別為 418bp和 508bp的片段（圖2，表4）。

圖2 PRRS電泳圖片

表4 PRRS電泳結(jié)果

2.3 山西豬場樣品中PRRSV ORF5基因測序

基因測序結(jié)果：ATGTTGGGGAAATGCTTGACCGCGGGTTACTGCTCGCAATTGCCTTTTTTGTGGTATATCGTGCCATTCTGTTTTGCTGTGCTCGTCAACGCCAACAGCAACAGCAGCTCCCATTTACAGTTGATTTATAACCTGACGATATGTGAGCTGAATGGCACAAAGTGGCTGGAAAAAAACAATTTTGACTGGGCTGTAGAGACTTTCGTTATTTTTCCTGTGCTCACTCATATTGTCTCTTACGGCGCCCTCACCACTAGCCATTTTCTTGACACGGTCGGCCTGATCACTGTGTCCACCGCCGGATATTATCACGGGCGGTATGTGTTGAGTAGCATCTACGCTGTCTGTGCCCTGGCTGCGTTGGTTTGCTTCGCCATTAGGTTGGCGAAAAATTGCATGTCCTGGCGCCTACTCTTGA

2.4 山西場毒株與常見毒株的雙序列比對結(jié)果

該場的毒株變異較大。R98、VR2332、CH1-R、CH1-a是經(jīng)典毒株的代表，其中VR2332是美國經(jīng)典毒株的疫苗毒株，CH1-R是國內(nèi)的經(jīng)典藍(lán)耳疫苗毒株。GD2008、GD-ZQ-2014是廣東毒株。TJ-M 是天津毒株的疫苗毒株。JXA1-R，HUN4-F112，TJ-M毒株是變異毒株的代表。NADC30是美國最新的流行毒株。HB-1/3.9是介于經(jīng)典毒株和變異毒株之間的一種藍(lán)耳毒株（表5）。

表5山西豬場毒株與常見毒株的同源性比對結(jié)果

2.5 山西場毒株基因進(jìn)化樹報(bào)告（圖3）

圖3 山西豬場樣品的PRRSV ORF5基因的進(jìn)化樹

2.6 確定以后健康母豬免疫方案

持續(xù)使用HuN4-F112株疫苗，母豬產(chǎn)后14天1頭份/頭跟胎免疫。

2.7 豬場疫情恢復(fù)情況

經(jīng)過養(yǎng)殖人員的努力，妊娠舍3月初開始好轉(zhuǎn)，分娩舍在2、3、4月死木畸比例分別為11.16%、17.28%、21.39%，尤其是死胎比例高，到5月初才開始好轉(zhuǎn)。四個(gè)月后該場各項(xiàng)繁殖生產(chǎn)指標(biāo)基本正常，基本恢復(fù)至發(fā)病前的生產(chǎn)水平。

表6 山西豬場采取各種防控措施后的生產(chǎn)恢復(fù)數(shù)據(jù)，

3 討論

3.1 山西場NADC30-LikePRRSV毒株爆發(fā)的原因分析。

3.1.1 豬場生物安全工作存在漏洞。

2017年春節(jié)假期期間，豬場人流、物流、車流較大，門衛(wèi)消毒程序、消毒液配比質(zhì)量、隔離等環(huán)節(jié)缺少有效監(jiān)督和落實(shí)，未能有效地控制傳染病的傳入；由于假期期間值班人員較少，造成人員串舍輪崗的現(xiàn)象頻繁，增加了PRRSV在豬場內(nèi)交叉?zhèn)鞑サ奈ｋU(xiǎn)；PRRSV有直接或間接接觸傳播、空氣傳播等多傳播途徑，使得該病毒進(jìn)入豬場可能性增大。

3.1.2

山西豬場疫苗毒株變動(dòng)頻繁，免疫程序繁瑣，PRRSV毒株容易變異，不同毒株之間容易發(fā)生重組。

PRRSV是一類屬于尼多病毒目（Nidovirales），動(dòng)脈炎病毒科（Arteriviridae），動(dòng)脈炎病毒屬（Arteriviridae）的單股正鏈的RNA病毒，具有特征性的套式轉(zhuǎn)錄/翻譯策略。成員之間有相似的基因組結(jié)構(gòu)和遺傳要素，但是在宿主特異性，疫病表型，病毒粒子形態(tài)，基因組大小，編碼內(nèi)容和細(xì)胞嗜性等方面有較大差異。這些基因型不斷變異的結(jié)果就是產(chǎn)生了大量具有不同致病性的毒株，同時(shí)給PRRSV的防控也帶來了很多不穩(wěn)定因素。而在突變和重組的過程中便為強(qiáng)毒株的產(chǎn)生孕育了基礎(chǔ)。

該病毒以RNA作為遺傳物質(zhì)，單鏈的結(jié)構(gòu)使得病毒的基因組十分不穩(wěn)定，極易發(fā)生突變和重組，有相當(dāng)活躍的變異行為，引起這種現(xiàn)象的原因可能與RNA依賴性RNA聚合酶（RdRp）缺乏校正機(jī)制有關(guān)，也可能與PRRSV頻繁的發(fā)生重組有關(guān)。免疫程序繁瑣且疫苗種類常換，使得發(fā)生PRRSV變異毒株成為可能。

不同疫苗產(chǎn)生的亞中和劑量PRRSV抗體，不僅不能對感染的PRRSV產(chǎn)生抑制效果，反而能促進(jìn)PRRSV的復(fù)制和增殖，這種現(xiàn)象稱為抗體依賴性的增強(qiáng)作用（antibodydependent enhancement，ADE）。如果一個(gè)豬場的豬群因?yàn)橐呙鐏y用等因素，導(dǎo)致PRRSV疫苗達(dá)不到預(yù)期的免疫效果，那么就會(huì)在PRRSV入侵時(shí)由于ADE的存在而加劇疫病的感染。

3.1.3

各種不良刺激因素的應(yīng)激對母豬帶來了危害，主要包括疫苗注射應(yīng)激、環(huán)境應(yīng)激等。

山西豬場因?yàn)榄h(huán)保壓力以及保溫防凍的掣肘，水泡糞沒有及時(shí)清除，只考慮保溫而不能及時(shí)通風(fēng)，造成室內(nèi)有害氣體濃度較大，豬舍內(nèi)的母豬普遍有眼角分泌物增多的，飼養(yǎng)員在室內(nèi)都有刺鼻、眼結(jié)膜發(fā)癢的反應(yīng)。加強(qiáng)豬舍環(huán)境控制，注意平時(shí)的室溫濕度和通風(fēng)，減少室內(nèi)有害氣體的含量，是保證豬只正常生長的前提。

1月份直接的兩種疫苗普免肌注應(yīng)激可能使本身免疫抵抗力低下的豬群突然發(fā)病。避免疫苗因素對母豬群的應(yīng)激，可以提前3d大群飼喂VC、微量元素等抗應(yīng)激藥物，這樣不僅可以延緩疫苗應(yīng)激，還可以增強(qiáng)疫苗的免疫效果。

3.1.4

山西場2016年12月從外場引過一批150頭后備母豬，引入豬場后隔離、馴化工作不到位。

現(xiàn)代規(guī)?；i場在擴(kuò)群工作方面，盡量要求是做到自繁自養(yǎng)，或者要慎重引種、少頻率引種，進(jìn)場后一定要做好隔離、馴化工作。自繁自養(yǎng)不僅可以保證延長豬群的健康穩(wěn)定性，更重要的是其可以有效的避免外部PRRSV毒株進(jìn)入養(yǎng)殖場，在豬群中擴(kuò)散、變異或重組。馴化的目的就是在不能對豬群PRRSV凈化的現(xiàn)況下，控制PRRSV在豬群中穩(wěn)定存在，對其不清除，也不使其爆發(fā)。馴化手段包括商業(yè)疫苗、本場分離毒株統(tǒng)一感染和抑制PRRSV毒血癥的排毒等。

從外部引入后備種豬的場，應(yīng)該嚴(yán)格制定并按照引種操作規(guī)范流程進(jìn)行。隔離、馴化期至少6周。隔離舍采取“全進(jìn)全出”管理方式，距原有豬群至少應(yīng)有100米，足夠遠(yuǎn)的距離通常更有利于減少潛在病原通過空氣傳播的危險(xiǎn)。理想的馴化程序也應(yīng)在隔離舍進(jìn)行，如果把高度健康的后備母豬和公豬，直接飼養(yǎng)在一個(gè)有病原存在且病原活躍的豬群中，引進(jìn)的種豬就會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重的健康問題，甚至表現(xiàn)出嚴(yán)重的疾病。后備母豬馴化措施包括：免疫、藥物添加；與原場豬或原場豬的糞便、木乃伊等接觸；將原豬群中母豬因患產(chǎn)道疾病的母豬與新引進(jìn)的種豬混群飼養(yǎng)1-2周。

3.2 本場妊娠母豬出現(xiàn)早產(chǎn)而不是流產(chǎn)現(xiàn)象的分析。

一般在行業(yè)內(nèi)母豬的流產(chǎn)是指妊娠期內(nèi)110d內(nèi)發(fā)生的，是指由于胎兒或母體異常而導(dǎo)致妊娠的生理過程發(fā)生障礙，從而導(dǎo)致妊娠中斷。早產(chǎn)一般是指妊娠2-7天發(fā)生的分娩。

PRRSV一般引起后期母豬流產(chǎn)的報(bào)道較多，而且該病毒對妊娠中斷的機(jī)理來看，應(yīng)該是引起流產(chǎn)。本案例現(xiàn)的大比例早產(chǎn)，一是可能是繁殖區(qū)人員的對配種日期記錄和預(yù)產(chǎn)期推算的錯(cuò)誤，二是臨產(chǎn)母豬是在圍產(chǎn)期就感染了PRRSV，從而引起早產(chǎn)，而不是在妊娠期感染引起流產(chǎn)。三是該NADC30-LikePRRSV致病機(jī)理的改變，造成該毒株的容易引起早產(chǎn)，這種推斷還需后期國內(nèi)外相同毒株的臨床報(bào)告，以及毒株分子致病毒力試驗(yàn)的證明。

3.3 本案例豬群防控結(jié)果因時(shí)間關(guān)系的評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)不夠詳細(xì)，缺少必要的豬群康復(fù)指標(biāo)，比如豬群抗體水平指標(biāo)情況。

該病例從2017年1月13日開始，大群臨床癥狀好轉(zhuǎn)從2月中旬開始，各種化驗(yàn)報(bào)告到4月24號才完全得出結(jié)果。以后的母豬徹底清凈工作需要大量的時(shí)間和數(shù)據(jù)，目前階段性的結(jié)果，只能從母豬群的繁殖性能指標(biāo)著手，比如說配種分娩率、死胎率、死木畸比例、產(chǎn)房成活率等。針對NADC30-Like PRRSV的影響，豬群后期的血清抗體ELISA數(shù)據(jù)，需要以后的3個(gè)月才能拿到，目前缺少直觀的實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)。

3.4 PRRS豬場發(fā)病期間藥物治療的選擇。

PRRSV的感染會(huì)引起機(jī)體產(chǎn)生免疫抑制，這樣就給其他病毒性疾病或細(xì)菌性疾病的感染創(chuàng)造了機(jī)會(huì)，多種病原的混合感染通常會(huì)導(dǎo)致更嚴(yán)重的臨床癥狀，應(yīng)及時(shí)給發(fā)病豬只添加必須的微量元素和抗生素。發(fā)病豬群整體使用干擾素或中草藥、微生態(tài)制劑可以提高豬只機(jī)體免疫力，從而在一定程度上保護(hù)了易感動(dòng)物，減輕臨產(chǎn)癥狀。豬場不要輕易更換疫苗毒株，否則會(huì)很容易使?jié)摲诘牟《景l(fā)病更嚴(yán)重或者引起ADE現(xiàn)象，加重疫情。

參考文獻(xiàn)（略）

作者簡介:尹訓(xùn)強(qiáng)(1987-),男,獸醫(yī)碩士,主要從事豬業(yè)生產(chǎn)管理及獸醫(yī)疾病診療與防控，Email:849165892@qq.com.

通信作者:施增斌(1970-)，男，高級執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師，主要從事養(yǎng)殖集團(tuán)事業(yè)部經(jīng)營管理和生產(chǎn)技術(shù)監(jiān)督，Email:83736981@qq.com