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摘要：2014年1月，在美國(guó)首次發(fā)現(xiàn)豬流行性腹瀉(PED)約9個(gè)月后，加拿大安大略省西南部的一個(gè)豬群確診了加拿大首個(gè)PED病例。對(duì)安大略省PED首個(gè)病例和后續(xù)10個(gè)病例進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查表明，飼料是一個(gè)共同的危險(xiǎn)因素。因此，通過(guò)RT-PCR檢測(cè)了若干批飼料和噴霧干燥豬血漿蛋白(SDPP)是否存在PEDV基因組。其中一些檢測(cè)呈陽(yáng)性，支持了受到污染飼料可能是將PEDV引入加拿大的觀點(diǎn)。生物測(cè)定實(shí)驗(yàn)表明，其中3個(gè)PEDV陽(yáng)性的SDPP樣本(來(lái)自一個(gè)批次)和2個(gè)PEDV陽(yáng)性的飼料樣本添加了該SDPP。3周齡仔豬口服接種，雖然接種后仔豬PEDV排毒不明顯，但SDPP接種仔豬PEDV排毒量較高，持續(xù)時(shí)間≥9d。盡管生物測(cè)定實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)過(guò)測(cè)試的PEDV基因組陽(yáng)性飼料沒(méi)有導(dǎo)致明顯的仔豬感染，但不排除被污染的飼料是引入的一個(gè)可能來(lái)源，因?yàn)樵S多其他變量可能發(fā)揮作用。

表1：實(shí)驗(yàn)組

注釋?zhuān)?

Experimental group：實(shí)驗(yàn)組

Inoculum：接種

Animal numbers：豬只數(shù)量

PEDV N gene RRT-PCR results：PEDV N基因RT-PCR結(jié)果

PEDV S gene RT-PCR results：PEDV S基因RT-PCR結(jié)果

Negative control：陰性對(duì)照

Positive control：陽(yáng)性對(duì)照

PEDV positive colon emulsion：PEDV陽(yáng)性結(jié)腸乳劑

Spray-dried plasma：噴霧干燥血漿蛋白

Feed：飼料

表2：生物測(cè)定實(shí)驗(yàn)

注釋?zhuān)?

Experimental group：實(shí)驗(yàn)組

Inoculum：接種

Animal numbers：豬只數(shù)量

Negative control：陰性對(duì)照

Feed group：飼料組

圖1：通過(guò)對(duì)豬直腸拭子樣本進(jìn)行N基因RT-PCR檢測(cè)，得到豬只個(gè)體PEDV排毒點(diǎn)狀圖。(a)陽(yáng)性對(duì)照組豬只接種PEDV陽(yáng)性結(jié)腸混懸液。(b)噴霧干燥血漿蛋白組。(c)陰性對(duì)照豬與陽(yáng)性對(duì)照豬接種后7d開(kāi)始接觸。(d)陰性對(duì)照豬從接種后7d開(kāi)始與噴霧干燥血漿接種豬接觸。

圖2：仔豬S蛋白基因序列比對(duì)。NCFAD 2014-022與測(cè)序的5個(gè)SDPP樣本序列相同。血漿#21-22、#25-26、#29-30、#32來(lái)SDPP接種的仔豬。NCFAD2014-18#1-10是安大略省首次發(fā)病后的10個(gè)病例。NCFAD 2014-35是來(lái)自魁北克的一個(gè)病例。MAFRI來(lái)自馬尼托巴省的一個(gè)病例，NCFAD 2014-41來(lái)自馬尼托巴省的一個(gè)環(huán)境樣本。Colorado(KF272920)和Indiana(KF452323)為美國(guó)PEDV分離株。

圖3：回腸組織病理學(xué)及免疫組化檢查結(jié)果。(a)絨毛萎縮，粘膜下水腫(*)，淋巴管擴(kuò)張(箭頭)。(b)固有層內(nèi)單核炎癥細(xì)胞增多(*)。可見(jiàn)立方體表面上皮細(xì)胞，有時(shí)呈空泡狀(箭頭所示)。(c)表面上皮細(xì)胞免疫染色陽(yáng)性(箭頭)。(d)免疫染色主要在刷狀緣可見(jiàn)。(e-f)陽(yáng)性對(duì)照豬接觸后5天。(e)絨毛縮短，腔內(nèi)有大量壞死碎片。(f)表面腸細(xì)胞呈陽(yáng)性免疫染色。(g-h)陰性對(duì)照豬回腸。(g)輕度炎癥，絨毛縮短。(h)免疫組化未檢測(cè)到PEDV抗原。