農業(yè)農村部辦公廳關于進一步嚴厲打擊違法研制生產經營使用非洲豬瘟疫苗行為的通知

各省、自治區(qū)、直轄市農業(yè)農村（農牧、畜牧獸醫(yī)）廳（局、委），新疆生產建設兵團農業(yè)農村局：

截至目前，包括中國在內的世界各國均未批準生產經營使用非洲豬瘟商品化疫苗，但非法使用非洲豬瘟疫苗問題時有反映。為切實推動非洲豬瘟防控工作有序開展，保持生豬生產恢復向好勢頭，現(xiàn)就嚴厲打擊違法研制生產經營使用非洲豬瘟疫苗行為有關事項通知如下。

一、嚴厲打擊違法研制非洲豬瘟疫苗行為

各省級畜牧獸醫(yī)主管部門要組織對轄區(qū)內科研教學單位、企業(yè)等所有獸醫(yī)實驗室開展排查活動，重點檢查是否違法從事非洲豬瘟疫苗研制活動；對實驗室冰箱保存的無標簽疫苗、病料或成份不明的試劑，要開展檢查檢測確認；對實驗活動記錄等要進行仔細核查。如發(fā)現(xiàn)有非洲豬瘟疫苗制苗用種毒或試制疫苗，要進一步核實種毒和試制疫苗的使用和去向情況。如發(fā)現(xiàn)涉嫌違法制售非洲豬瘟疫苗線索，要立即立案查處，依照《獸藥管理條例》《病原微生物實驗室生物安全管理條例》從嚴從快從重處理；涉嫌犯罪的，依法移送公安機關追究刑事責任。要加強對非洲豬瘟疫苗實驗室研究、臨床試驗單位和中試生產企業(yè)監(jiān)督檢查，重點檢查開展非洲豬瘟疫苗研究的實驗室條件是否符合要求，實驗活動、臨床試驗等是否經過審批，臨床試驗范圍等是否與批準的試驗方案一致，中試條件和生物安全防范措施是否符合要求，是否存在非法轉移中試產品及其種毒行為等。發(fā)現(xiàn)未經批準、擅自開展非洲豬瘟疫苗相關實驗室研究活動、臨床試驗或非法轉移中試產品及其種毒的，要立案查處，并依照《獸藥管理條例》《病原微生物實驗室生物安全管理條例》從嚴從快從重處罰。

二、嚴厲打擊違法生產非洲豬瘟疫苗行為

各省級畜牧獸醫(yī)主管部門要組織對轄區(qū)內獸用生物制品生產企業(yè)開展全面檢查，排查是否存在違法制售非洲豬瘟疫苗行為。重點檢查生產企業(yè)的隱蔽場所、原材料出入庫情況、試驗動物購買和使用情況、資金往來情況等，全面查找非法制售假疫苗線索。如發(fā)現(xiàn)違法制售非洲豬瘟疫苗行為，要進一步核查疫苗生產銷售數量和銷售對象、生產種毒來源等信息，并依照《獸藥管理條例》第五十六條規(guī)定和《獸藥嚴重違法行為從重處罰情形》從嚴從快從重處理，吊銷《獸藥生產許可證》，獸藥生產企業(yè)主要負責人和直接負責的主管人員終身不得從事獸藥生產活動。涉嫌犯罪的，及時依法移送公安機關追究刑事責任。

三、嚴厲打擊違法經營非洲豬瘟疫苗行為

各省級畜牧獸醫(yī)主管部門要組織對轄區(qū)內獸藥經營企業(yè)開展全面檢查，排查是否存在經營所謂“非洲豬瘟中試苗、自家苗、進口苗”等非法疫苗行為。重點檢查無標簽疫苗、出入庫記錄、資金往來等情況，全面查找違法經營假疫苗線索。如發(fā)現(xiàn)違法經營非洲豬瘟疫苗行為，要進一步核查假疫苗來源、銷售對象和數量等信息，并依照《獸藥管理條例》第五十六條規(guī)定和《獸藥嚴重違法行為從重處罰情形》從嚴從快從重處理，吊銷《獸藥經營許可證》，獸藥經營企業(yè)主要負責人和直接負責的主管人員終身不得從事獸藥經營活動。涉嫌犯罪的，及時依法移送公安機關追究刑事責任。

四、嚴厲打擊違法使用非洲豬瘟疫苗行為

各省級畜牧獸醫(yī)主管部門要組織對轄區(qū)內生豬養(yǎng)殖企業(yè)（場、戶）開展檢查，排查是否存在違法使用非洲豬瘟疫苗行為。重點檢查冰箱冰柜是否保存有可疑疫苗、疫苗購買記錄、免疫接種記錄、檢測記錄、資金往來等信息，全面查找違法使用假疫苗線索。如發(fā)現(xiàn)違法使用非洲豬瘟疫苗行為，要進一步核查假疫苗來源和數量等信息，并依據《獸藥管理條例》第六十二條和《獸藥嚴重違法行為從重處罰情形》從嚴從快從重處罰。必要時商請公安機關聯(lián)合辦案，一查到底。對養(yǎng)殖企業(yè)（場、戶）使用非洲豬瘟非法疫苗免疫接種的豬只，一經檢測為陽性的，視為非洲豬瘟感染豬，予以撲殺，并不得給予補助。

五、組織開展非洲豬瘟疫苗毒鑒別檢測

各省級畜牧獸醫(yī)主管部門在按照《2020年全國非洲豬瘟監(jiān)測方案》組織做好轄區(qū)內非洲豬瘟監(jiān)測基礎上，要組織開展鑒別檢測，對來自養(yǎng)殖場、采用實時熒光PCR方法檢測結果為陽性的組織、血液或口鼻拭子等樣品，可按照“非洲豬瘟病毒流行株與基因缺失株鑒別檢測規(guī)范”（見附件）進行鑒別檢測。鑒別檢測結果顯示為基因缺失病毒的，各檢測單位要第一時間將檢測結果及樣品來源信息報省級畜牧獸醫(yī)主管部門。對涉嫌違法單位，省級畜牧獸醫(yī)主管部門要立即組織立案查處。

中國動物疫病預防控制中心和中國動物衛(wèi)生流行病學中心在開展非洲豬瘟病毒監(jiān)測的同時，要對來自養(yǎng)殖場、采用實時熒光PCR方法檢測結果為陽性的組織、血液或口鼻拭子等樣品進行鑒別檢測。鑒別檢測結果顯示為基因缺失病毒的，第一時間將檢測結果及樣品來源信息報我部畜牧獸醫(yī)局。

六、嚴格執(zhí)行非洲豬瘟疫苗“五禁止”監(jiān)管措施

非洲豬瘟疫苗監(jiān)管工作對非洲豬瘟疫情防控和生豬生產恢復影響深遠，采取強力措施、堅決遏制非法研制生產經營使用非洲豬瘟疫苗行為是目前各地畜牧獸醫(yī)主管部門面臨的緊迫任務。為保證非洲豬瘟疫苗監(jiān)管職責落實到位，各地畜牧獸醫(yī)主管部門和相關從業(yè)人員要嚴格執(zhí)行非洲豬瘟疫苗“五禁止”監(jiān)管措施，即：禁止未經批準開展實驗活動，禁止未經審批開展臨床試驗，禁止生產非法疫苗，禁止經營非法疫苗，禁止使用非法疫苗。對存在違法研制生產經營非洲豬瘟疫苗行為的單位及其主要負責人、直接負責的主管人員，一經查實，全部列入失信懲戒名單，列為重點監(jiān)管對象，從嚴審核行政許可審批事項。

各省級畜牧獸醫(yī)主管部門要及時總結打擊違法研制生產經營使用非洲豬瘟疫苗行為進展情況，并于11月30日前將相關工作情況報送我部畜牧獸醫(yī)局。

附件：非洲豬瘟病毒流行株與基因缺失株鑒別檢測規(guī)范

附件

非洲豬瘟病毒流行株與基因缺失株鑒別檢測規(guī)范

本規(guī)范適用于非洲豬瘟病毒流行毒株與非洲豬瘟病毒CD2v和MGF 360-505R基因缺失株的熒光PCR方法鑒別檢測。

1.主要試劑

1.2 無核酸酶水。

1.3 熒光PCR預混液（2×）。

1.4 引物和探針：P72、CD2v、MGF360-505R基因擴增引物和探針由國家非洲豬瘟參考實驗室設計并提供（聯(lián)系人：李林，電話：0532-87839188）。

1.5 陽性和陰性對照：陽性對照樣品為ASFV基因組DNA標準物質（用無核酸酶水稀釋1000倍后使用），由國家非洲豬瘟參考實驗室提供；陰性對照樣品為無核酸酶水。

2. 主要儀器設備

2.1 熒光PCR擴增儀。

2.2 臺式低溫高速離心機。

2.3 組織勻漿機。

2.4 微量可調移液器（2.5 μL、10 μL、100 μL、200 μL、1000 μL等不同規(guī)格）。

2.5 無核酸酶離心管與吸頭。

2.6 PCR擴增管。

3. 樣品采集和運輸保存

對活豬，可采集抗凝全血（EDTA抗凝）、口鼻拭子或血清等；對病死豬或已屠宰豬，可采集脾臟、淋巴結、扁桃體、肝臟等組織。盡快送至實驗室進行病毒核酸檢測。

樣品的運送與保存應滿足NY/T 541《獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運輸技術規(guī)范》相關要求。上述樣品可在4°C最長保存2天；如需長時間保存，應置于-20°C以下。

4.樣品處理

取0.1 g～0.2 g樣品，加入1 mL～2 mL預冷的PBS（pH 7.4），用組織勻漿機高速勻漿，制成10%組織勻漿液，以5000 r/min離心10 min，取200 μL上清液進行核酸提取。

4.2 液體樣品

抗凝全血、血清等液體樣品不需進行特殊處理，直接取200 μL進行核酸提取。

5.病毒核酸的提取和純化

6. 熒光PCR檢測

在滅菌的離心管中制備符合檢測樣品數量（包括陽性、陰性對照）要求的熒光PCR反應混合液，至少額外制備兩個樣品的量。每個樣品配制20 μL PCR反應混合液，組成如下：7.5 mL P72、CD2v、MGF360-505R基因引物、探針預混液（P72、CD2v、MGF360-505R基因探針分別用FAM、VIC和Cy5進行標記）、12.5 mL 2×探針法熒光PCR預混液。

分別取20 μL PCR反應混合液加至每個PCR擴增管中；再分別取5 μL DNA模板加入到PCR擴增管中。每次進行熒光PCR擴增時均應設立陽性、陰性對照。陽性對照應用陽性對照樣品所提取核酸作為模板，陰性對照應用陰性對照樣品所提取核酸作為模板。加入模板后，密封PCR擴增管，瞬時離心。將所有PCR擴增管放在熒光PCR儀中。按下述條件運行擴增程序。

6.2 熒光PCR擴增條件

50°C孵育2min；95°C預變性5min；95°C變性15s，60°C退火延伸1min，45個循環(huán)，在每一循環(huán)的60°C時收集FAM、VIC和Cy5通道中的熒光信號。

6.3 結果分析

Ct值由熒光PCR儀的軟件自動確定。

6.3.1 試驗成立條件

陽性對照P72、CD2v、MGF 360-505R基因的Ct值均＜35且出現(xiàn)特異性擴增曲線，陰性對照P72、CD2v、MGF 360-505R基因無Ct值或陰性對照P72、CD2v、MGF 360-505R基因Ct值≥40且無特異性擴增曲線，判為試驗有效。試驗無效時應重新進行試驗。

6.3.2 P72、CD2v、MGF 360-505R基因檢測結果判定

6.3.2.1P72基因檢測結果判定（FAM通道）

被檢樣品Ct值≤38且出現(xiàn)特異性擴增曲線，判為ASFV P72基因檢測陽性；無Ct值或Ct值≥40，判為ASFV P72基因檢測陰性；38＜Ct值＜40且出現(xiàn)特異性擴增曲線，判為疑似。對疑似樣品，再進行1次復檢，做3個重復；至少2個重復Ct值＜40且出現(xiàn)特異性擴增曲線即判為ASFV P72基因檢測陽性，否則判為ASFV P72基因檢測陰性。

6.3.2.2 CD2v基因檢測結果判定（VIC通道）

被檢樣品Ct值≤38且出現(xiàn)特異性擴增曲線，判為ASFV CD2v基因檢測陽性；無Ct值或Ct值≥40，判為ASFV CD2v基因檢測陰性；38＜Ct值＜40且出現(xiàn)特異性擴增曲線，判為疑似。對疑似樣品，再進行1次復檢，做3個重復；至少2個重復Ct值＜40且出現(xiàn)特異性擴增曲線即判為ASFV CD2v基因檢測陽性，否則判為ASFV CD2v基因檢測陰性。

6.3.2.3MGF 360-505R基因檢測結果判定（Cy5通道）

被檢樣品Ct值≤38且出現(xiàn)特異性擴增曲線，判為ASFV MGF 360-505R基因檢測陽性；無Ct值或Ct值≥40，判為ASFV MGF 360-505R基因檢測陰性；當38＜Ct值＜40且出現(xiàn)特異性擴增曲線，判為疑似。對疑似樣品，再進行1次復檢，做3個重復；至少2個重復Ct值＜40且出現(xiàn)特異性擴增曲線即判為ASFV MGF 360-505R基因檢測陽性，否則判為ASFV MGF 360-505R基因檢測陰性。

6.3.3 綜合判定

結合P72、CD2v、MGF 360-505R等3個基因的檢測結果進行綜合判定。具體判定標準見附表。

附表 綜合判定標準

注：“+”代表檢測陽性；“-”代表檢測陰性

農業(yè)農村部辦公廳

2020年8月24日

抄送單位：中國動物疫病預防控制中心、中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所、中國動物衛(wèi)生與流行病學中心